制備液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支,以液體為流動(dòng)相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。
制備液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn),但也有缺點(diǎn),與氣相色譜相比各有所長(zhǎng),相互補(bǔ)充。液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間,除了柱子以外的任何死空間(進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等)中,如果流動(dòng)相的流型有變化,被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬,柱效率降低。液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。
在柱層析中,溶劑在重力作用下滴入裝有吸附劑的色譜柱中。液相色譜是一種改進(jìn)的柱色譜。在高達(dá)400個(gè)大氣壓的高壓下,泵輸送溶劑通過色譜柱。柱吸附劑或固定相通常是由固體顆粒(如二氧化硅或聚合物)制成的顆粒材料。
與柱色譜相比,利用泵輸送,不僅可以快速分析,而且可以使用更小的顆粒作為柱填料。粒子越小,其表面積更大,通過固定相與流動(dòng)相及樣品組分之間的相互作用,可以更好地實(shí)現(xiàn)混合物中各組分分離。流動(dòng)相通常是溶劑(如水、乙腈、甲醇)的混合物。
提高液相色譜中柱效的有效途徑有:減小填料粒徑,增加色譜柱長(zhǎng),使用盡量大小均一、外型規(guī)則的填料,使用合適的流速,使用合適的流動(dòng)相組成,使用合適的固定相。